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?中瑞祥解析活性氧測定儀的使用步驟

活性氧測定儀 使用原理?主要基于熒光探針 DCFH-DA （2',7'-二氯二氫熒光素二乙酸酯）的氧化反應。DCFH-DA本身沒有熒光，可以自由穿過細胞膜，進入細胞后被細胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH（2',7'-二氯二氫熒光素）。DCFH不能通透細胞膜，從而被細胞內(nèi)的活性氧（ROS）氧化生成有綠色熒光的DCF（二氯熒光素）。DCF的熒光強度與細胞內(nèi)ROS的水平成正比，因此可以通過檢測DCF的熒光強度來定量測定細胞內(nèi)的ROS水平?

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活性氧測定儀的使用步驟

?裝載探針?：對于刺激時間較短的細胞（通常為2小時內(nèi)），先裝載探針后再進行刺激；對于刺激時間較長的細胞（通常為6小時以上），先進行刺激后再裝載探針。

?細胞準備?：檢測前一天進行細胞鋪板，確保檢測時細胞數(shù)量小于5×10^5/mL。

?藥物誘導?：去除細胞培養(yǎng)液，加入無血清培養(yǎng)基稀釋的藥物處理，于37℃細胞培養(yǎng)箱內(nèi)避光孵育，實際誘導時間由藥物特性和細胞類型決定。

?陽性對照?：可選步驟，先用無血清培養(yǎng)基稀釋陽性對照（如Rosup）到常用工作濃度，加入細胞中孵育30分鐘至4小時，以提高活性氧水平。

?探針裝載?：吸除處理藥物，加入稀釋好的DCFH-DA工作液，37℃細胞培養(yǎng)箱內(nèi)避光孵育30分鐘。

?細胞清洗?：用無血清培養(yǎng)液洗滌細胞1-2次，以去除未進入細胞的DCFH-DA。

?熒光檢測?：使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀等設(shè)備，在激發(fā)波長502 nm、發(fā)射波長530 nm附近檢測DCF的熒光強度?

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活性氧測定儀的應用領(lǐng)域和重要性

活性氧（ROS）在細胞生長增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡等生理和病理過程中起著重要作用。通過測定細胞內(nèi)的ROS水平，可以了解細胞在不同條件下的氧化應激狀態(tài)，對于研究疾病機制、藥物毒性評估以及開發(fā)新的治療方法具有重要意義。此外，活性氧測定儀還廣泛應用于生物醫(yī)學研究、環(huán)境監(jiān)測和食品安全等領(lǐng)域?